›› 2011, Vol. 23 ›› Issue (2): 128-133.doi: 10.3969/j.issn.1004-616x.2011.02.011
周长慧1,王 征1,王庆利2,杨琛懋1,常 艳1﹡
ZHOU Chang-hui1,WANG Zheng1,WANG Qing-li2,YANG Chen-mao1,CHANG Yan1,*
摘要: 为克服传统显微镜检微核(micronucleus,MN)方法耗时、费力、主观等缺点,建立基于CD71、CD61荧光抗体和碘化丙啶(cyclophosphamidr,PI)的三色流式细胞术(flow cytometry,FCM)研究小鼠外周血微核的自动化检测方法。 方法: 经口单次给予小鼠0、20、40和80 mg/kg环磷酰胺(CP),于不同时间点收集外周血;另一批小鼠给予CP 40 mg/(kg·d)经口灌胃,连续染毒5 d,分别于给药前和每次给药后24 h收集外周血。采用-80 ℃甲醇固定血细胞,CD71、CD61荧光抗体、RNA酶和PI孵育血细胞,以疟原虫感染的红细胞作为生物标准物调校FCM后,对CP诱导的小鼠外周血中含MN的CD71+网织红细胞(reticulocytes,RET)进行检测。 结果: 单次染毒后48 h MN-RET达峰值,且MN-RET呈现明显的剂量依赖性增加(r =0.984 9, P<0.01);重复染毒5 d,FCM监测的 MN-RET染毒2 d后达到稳态水平。FCM检测的MN-RET峰值和稳态水平与常规显微镜观察的骨髓微核率有良好的相关性(r=0.921 2, P<0.01)。 结论: FCM小鼠外周血微核法稳定可靠,可以作为常规显微镜小鼠骨髓阅片法的替代方法,用于小鼠体内微核试验。